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农学学报 ›› 2014, Vol. 4 ›› Issue (11): 80-84.doi: 10.11923/j.issn.2095-4050.2013-xb0938

所属专题： 生物技术

• 畜牧 兽医 水产 • 上一篇    下一篇

海带属配子体DNA提取及ISSR-PCR体系优化

李言,崔翠菊,罗世菊,李晓捷,赵聚萍,赛珊,钱瑞,武瑞娜   

  1. 山东东方海洋科技股份有限公司,山东东方海洋科技股份有限公司,山东东方海洋科技股份有限公司,山东东方海洋科技股份有限公司,山东东方海洋科技股份有限公司,山东东方海洋科技股份有限公司,山东东方海洋科技股份有限公司,山东东方海洋科技股份有限公司
  • 收稿日期:2013-11-20 修回日期:2013-11-20 接受日期:2014-04-29 出版日期:2014-12-05 发布日期:2014-12-05
  • 通讯作者: 崔翠菊 E-mail:x1uiis
  • 基金资助:
    国家科技支撑计划“海藻栽培新种质苗种繁育与栽培技术研究及产业化示范”(2012BAD55G01)；国家863 重大项目“基于全基因组信息的藻类遗传选育”(2012AA10A406)；烟台市科技发展计划项目“药用和食用海藻新种质苗种繁育与栽培技术研究及产业化示范”(2013LGS002)。

Genomic DNA Extraction and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Saccharina

  • Received:2013-11-20 Revised:2013-11-20 Accepted:2014-04-29 Online:2014-12-05 Published:2014-12-05

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摘要： 为了建立一个重现性好、稳定性高，适用于海带属ISSR遗传分析的PCR反应体系，从海带属配子体材料中提取基因组DNA作为模板，应用正交设计试验对反应体系中各因子的不同浓度进行组合优化。结果显示：适用于海带ISSR 扩增反应的最佳体系(20 μL)为：1×PCR buffer，1.2 mmol/L Mg2 +，0.2 mmol/L dNTPs，1.0 μmol/L ISSR 引物，40 ng 模板DNA，0.25 U Taq DNA 聚合酶；扩增PCR 程序为：95℃预变性3 min；95℃变性45 s，52℃退火45 s，72℃延伸2 min，共38 个循环；最后72℃延伸10 min。在优化的海带ISSR 反应条件下，扩增条带稳定，重现性好，为应用ISSR 分子标记技术进行海带属遗传多样性研究和分子鉴定奠定了技术基础。

关键词: 农产品出口, 农产品出口, 出口竞争力, 国际市场占有率(IMS), 显示性比较优势指数(RCA), 出口竞争力系数(CI)

Abstract: In order to establish a reproducible, stable, and suitable reaction system of Saccharina for ISSR analysis of genetic differences, the genomic DNA extracted from gametophytes of Saccharina was used as template, the different concentrations of the factors in reaction system were optimized by orthogonal design experiment. The results showed that, the optimal ISSR reaction system (20 μL) contained 1 ×PCR buffer, 1.2 mmol/L Mg2 , 0.2 mmol/L dNTPs, 1 μmol/L ISSR primer, 40 ng template DNA and 0.25 U Taq DNA polymerase. The PCR program was pre-denatured at 95℃ for 3 min and followed by 38 cycles of 45 s at 95℃, 45 s at 52℃, 2 min at 72℃, and final extension of 10 min at 72℃. The optimal ISSR reaction system was stable and repeatable. This system could provide the technical foundation for the application of ISSR molecular marker technology for the study on genetic diversity and molecular identification ofSaccharina .

中图分类号: