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农学学报 ›› 2012, Vol. 2 ›› Issue (11): 6-11.

所属专题： 生物技术； 园艺

• 农艺科学 作物遗传育种 生理生化 • 上一篇    下一篇

甜菜NADH-NR gDNA全长序列的克隆及酶切鉴定

丁广洲 侯静 马凤鸣 陈丽 陈连江   

  • 收稿日期:2012-07-12 修回日期:2012-08-17 出版日期:2012-11-20 发布日期:2012-11-20
  • 基金资助:

    甜菜NADH-NR基因的克隆及表达调控研究

Cloning of NADH-NR gDNA Full-length Sequence and Enzyme Digestion

  • Received:2012-07-12 Revised:2012-08-17 Online:2012-11-20 Published:2012-11-20

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摘要：

为了研究甜菜NADH-NR gDNA的序列特征，从分子水平上为甜菜硝酸盐累积差异机理的研究做铺垫；利用二倍体甜菜品种‘甜研7号’，采用分步克隆方法，分别获得甜菜NADH-NR基因组DNA的3’端序列和5’端序列以及中间序列，再以3’端和5’端序列设计特异引物，克隆获得甜菜NADH-NR基因组DNA的全序列；结果表明，甜菜NADH-NR gDNA全长序列6346 bp，经与先前获得的甜菜NADH-NR cDNA序列比对，甜菜NADH-NR gDNA含有3个内含子，4个外显子。内含子大小分别为197、1088、2343 bp。甜菜NADH-NR gDNA的外显子序列与菠菜的同源性达到78%，但内含子序列在进化期间发生了较大分化，甜菜NADH-NR gDNA的内含子相对菠菜要大，两者也不处于同样的位点，甜菜NADH-NR gDNA的内含子靠近5'端较早出现，每个内含子大小均是菠菜的1.10~1.71倍。本研究首次从甜菜中克隆获得NADH-NR gDNA全长序列，揭示了其序列特征并将其与其他作物进行了比较分析，为进一步利用该基因开展甜菜硝酸盐含量的基因调控研究奠定了基础。

关键词: 鹤望兰, 鹤望兰, 不同光照, 抗寒性, 生理指标

Abstract:

Using diploid sugar beet variety Ty7, obtained 3′end region, 5′end region and middle sequence respectively by stepwise cloning method. And then designed specific primer according to 3′end and 5′end region, the complete genomic sequence of nitrate reductase was assembled, The full-length sequence of nitrate reductase genomic DNA was 6,346 bp long. Proved the sequence obtained was target sequence by enzyme digestion. The results of sequence comparisons with its cDNA cloned previously showed that nitrate reductase genomic DNA has three introns, the sizes of the introns were: 197bp, 1088bp and 2343bp.